番茄褐色皱果病毒(ToBRFV)

番茄褐色皱果病毒(Tomato brown rugose fruit virus,ToBRFV),属帚状病毒科、烟草花叶病毒属,是近年来新发现的一种为害番茄、辣椒等作物的病原物。由于该病毒为害的严重性和种传的高风险性,已有多个国家(地区)和组织发出警示通报或采取相应植物检疫措施。

主要分布

截至目前,德国、英国、意大利、希腊、荷兰、西班牙、法国、墨西哥、美国、以色列、约旦、土耳其等多个国家或地区相继报道发现ToBRFV;其中,该病毒在以色列分布最广,已覆盖该国的全部番茄栽培区。

          寄主及症状

ToBRFV主要侵染番茄、辣椒等植物,人工接种寄主有苋色藜、昆诺藜、本氏烟、矮牵牛、龙葵等植物。

 

ToBRFV侵染番茄、辣椒时,主要发生在叶片和果实部位。番茄叶片表现为褪绿、花叶、斑驳,有时出现叶片变窄、畸形、坏死;番茄果实表现为出现绿色、黄色、褐色色斑,表面粗糙,畸形,叶柄、花梗和花萼出现坏死。在辣椒上的症状与番茄相似,主要表现为叶片变形、变黄,有斑点,果实变形及出现黄、棕或绿色条纹。

 

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番茄褐色皱果病毒

(ToBRFV)检测试纸条说明书

一、试剂盒组成:

ToBRFV试纸条     50条

植物组织研磨袋   50个

样品提取液 50mL  1瓶

二、操作步骤:

1. 样品制备:

1.1 植物样品制备方法一:

1)植物样品的采集:从花叶等病毒样症状明显的番茄叶片上用手或剪刀等取半块大拇指指甲大小的1块叶片(30-50毫克),放入提供的研磨塑料袋中;

2)植物样品的搓烂和匀浆:用提供的吸管吸2管样品提取液(约1毫升)加到含有叶片的研磨袋中,双手像搓衣服一样搓塑料袋至叶片完全粉碎,并在样品提取液中混匀。

1.2 植物样品制备方法二:

1)采集花叶等病毒样症状明显的番茄叶片,称重后取约30-50毫克的叶片组织放到研钵中;

2)研钵中加入1毫升的提取液后用研棒研磨匀浆1分钟;

3)匀浆液移至1.5毫升塑料离心管中,5000转/分钟离心3 分钟,或静置3分钟,上清即为样品检测液。

 

2.样品检测:

从铝箔袋中取出试纸条,如下图所示将其正面朝上平放,用吸管吸取上述制备好的样品提取液滴3-4滴到加样孔中


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4. 结果判读:

在3~10分钟内观察结果,如下图中1所示,在C线(对照线)和T线(检测线)位置均出现显色为阳性结果;如下图中2所示仅在C线显色而T线不显色为阴性结果;若C线和T线均未显色,或仅在T线显色 而C线不显色,说明该试纸条失效。

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三、注意事项:

1.       检测植物时,取病叶量不能多,严格控制取样量,半个或一个大拇指指甲大小已足够了,取太多的叶片的话叶片中的叶绿体会影响检测显色的,而且该试纸条检测灵敏度是非常高的,不会存在取样品量不足造成假阴性的现象;

2.       试纸条保存于干燥密封铝箔袋中,现用现取;

3.       试纸条用于ToBRFV的检测;

4.       取样时应采集病毒症状明显的番茄叶片。ToBRFV感染瓜类植物的症状包括:褪绿、花叶、叶片变窄、花梗坏死、褐色皱纹果、果实脱落。

5.       用手、剪刀或刀片取样,每取完一次样品均需用自来水清洗干净;

6.       胶体金试纸条必须用提供的样品提取液,不能用其它样品提取液;

7.       每根吸管只能用于1个样品的吸取和加样,禁止同一根吸管用于多个样品的吸取和加样。

四、贮存条件: 4℃~35℃常温避光保存,切勿冷藏或冷冻。

五、生产日期和有效期:生产日期详见包装盒,有效期为24个月。